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    研域解析:酶符號抗體的制備辦法

    發(fā)布時(shí)間: 2020-02-14  點(diǎn)擊次數(shù): 1770次

    酶符號抗體的制備辦法主要有兩種,即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。 
    (1)戊二醛交聯(lián)法:戊二醛是一種雙功用團(tuán)試劑,它可以使酶與蛋白質(zhì)的氨基通過它而聯(lián)合。堿性磷酸一般用此法進(jìn)行符號。交聯(lián)辦法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接參加酶與抗體的混合物中,反應(yīng)后即得酶符號抗體。 
    ELISA中常用的酶一般都用此法交聯(lián)。它具有操作簡潔、有效(結(jié)合率達(dá)60%-70%)和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是交聯(lián)反應(yīng)是隨機(jī)的,酶與抗體交聯(lián)時(shí)分子間的份額不嚴(yán)格,結(jié)合物的巨細(xì)也不均一,酶與酶,抗體與抗體之間也有或許交聯(lián),影響效果。兩步法的產(chǎn)品中絕大部分的酶與蛋白質(zhì)是以1:1的份額結(jié)合的,較一步法的酶結(jié)合物更有助于本底的改進(jìn)以提高敏感度,但其偶聯(lián)的有效率較一步法低。 
    (2)過碘酸鹽氧化法:本法只適用于含糖量較高的酶。辣根過氧化物酶的符號常用此法。反應(yīng)時(shí),過碘酸鈉將HRP分子外表的多糖氧化為醛基很活潑,可與蛋白質(zhì)上的氨基構(gòu)成Schiff氏堿而結(jié)合。
    按以上辦法制備的酶結(jié)合物一般都混有未結(jié)合物的酶和抗體。理論上,結(jié)合物中混有的游離酶一般不影響ELISA中zui后的酶活性測定,因通過*洗滌,游離酶可被除掉,并不影響顯色。但游離的抗體則不同,它會(huì)與酶標(biāo)抗體競爭相應(yīng)的固相抗原,從而減少了斷合到固相上的酶標(biāo)抗體的量。

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